在ELISA实验中,洗涤是实验操作多的一个步骤:通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体干扰物质。因此,不严格的洗涤容易出现交叉污染或洗不干净背景高。实验开始,上海轩泽康生物就试剂配置说明:配置时要用新鲜无污染的蒸馏水或去离子水现配现用,洗涤如果结晶应待其溶解后配置。 试剂的准备:20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
ELISA试剂盒洗板方法: 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 操作注意事项如下: 1)垂直倒液,迅速、干脆,重复2-3次,不要手腕左右摇摆、旋转来倒液体。 2)倒液后将酶标板放在吸水纸拍干。用干净的滤纸,不要用卫生纸,因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底,导致洗板不干净,结果偏高或偏低,重复孔的数值也会相差很大。 3)每孔加300uL洗液,太多将溢出孔外污染相邻的孔。特别是每次洗板的两遍,若高浓度孔流串到低浓度孔或空白孔,其造成的交叉污染将无法洗掉,背景增高。 4)加入洗液浸泡30s。洗板时间太短,洗涤效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。
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